Determinarea proteinelor (cuantificarea). Determinarea proteinelor în urină - abilități practice ale unui medic pediatru

Indicatori normali: Proteina se găsește în mod normal în urină în cantități minime, care nu sunt detectate prin reacții calitative obișnuite. Limita superioară a proteinelor normale în urină este de 0,033 g/l. Dacă conținutul de proteine ​​este mai mare decât această valoare, atunci testele de proteine ​​de calitate devin pozitive.

Semnificația clinică a definiției:

Apariția proteinelor în urină se numește proteinurie. Proteinuria poate fi falsă și renală. Proteinuria extrarenală poate apărea în prezența impurităților proteice din organele genitale (vaginită, uretrita etc.), cantitatea de proteine ​​este nesemnificativă - până la 0,01 g/l. Proteinuria renală poate fi funcțională (cu hipotermie, efort fizic, febră) și organică - cu glomerulonefrită, pielonefrită, nefrită, nefroză, insuficiență renală. Cu proteinuria renală, conținutul de proteine ​​poate fi de la 0,033 până la 10 - 15 g/l, uneori mai mare.

Definiție calitativă.

Principiul metodei: bazat pe faptul că proteina se coagulează (devine vizibilă) sub influența acizilor anorganici. Gradul de turbiditate depinde de cantitatea de proteine.

Detectarea proteinelor în urină cu acid sulfosalicilic 20%.

Reactivi: soluție de acid sulfosalicilic 20%. Echipament: fundal închis.

Progresul studiului:

2. 2 ml de urină preparată se toarnă în 2 eprubete de același diametru. 1 eprubetă – control, 2 – experiment. Adăugați 4 picături de acid sulfosalicilic 20% în eprubetă.

3. Rezultatul este notat pe un fundal întunecat.

4. În prezența proteinelor, urina din eprubetă devine tulbure.

Determinarea calitativă a proteinei în testul de urină - benzi.

Pentru depistarea proteinuriei se folosesc diverse benzi monotest: Albufan, Albustix, Biofan E și politeste: Triscan, Nonafan etc.

Cuantificare.

Detectarea proteinelor în urină folosind metoda Roberts-Stolnikov.

Principiul metodei: bazat pe faptul că proteina se coagulează (devine vizibilă) sub influența acizilor anorganici. Gradul de turbiditate depinde de cantitatea de proteină (adică testul inel al lui Heller). Când concentrația de proteine ​​în urină este de 0,033 g/l, apare un inel alb subțire, asemănător unui fir, la sfârșitul a 3 minute după stratificarea urinei.

Reactivi: soluție de acid azotic 50% sau reactiv Roberts (98 părți soluție saturată de clorură de sodiu și 2 părți acid clorhidric concentrat) sau reactiv Larionova (98 părți soluție saturată de clorură de sodiu și 2 părți acid azotic concentrat).

Echipament: fundal închis.

Progresul studiului:

1. Cerinte pentru urina: urina trebuie sa aiba un pH acid (sau usor acid), trebuie sa fie transparenta, pentru aceasta urina se centrifuga. Urina alcalină este acidulată până la o reacție ușor acidă folosind hârtie indicator pentru control.

2. Se toarnă 2 ml de soluție de acid azotic 50% sau unul dintre reactivi în eprubetă, apoi se adaugă cu grijă același volum de urină preparată de-a lungul peretelui eprubetei folosind o pipetă.

3. Proba se lasă timp de 3 minute

4. După 3 minute, rezultatul este raportat. Rezultatul este observat pe un fundal întunecat în lumină transmisă. Dacă inelul este larg și compact, atunci urina este diluată cu apă distilată și din nou stratificată pe reactiv.

5. Urina se diluează până după 3 minute se formează un inel subțire sub formă de fir.

C = 0,033 g/l x grad de diluție.

Cantități mici de proteine ​​se găsesc în urina de 24 de ore la persoanele sănătoase. Cu toate acestea, astfel de concentrații mici nu pot fi detectate folosind metode de cercetare convenționale. Eliberarea de cantități mai mari de proteine, la care testele calitative obișnuite pentru proteine ​​​​în urină devin pozitive, se numește proteinurie. Există proteinurie renală (adevărată) și extrarenală (falsă). În cazul proteinuriei renale, proteinele intră în urină direct din sânge datorită filtrării crescute de către glomerulii rinichilor sau scăderii reabsorbției tubulare.

Proteinurie renală (adevărată).

Proteinuria renală (adevărată) poate fi funcțională sau organică. Dintre proteinuria renală funcțională, se observă cel mai adesea următoarele tipuri:

Proteinuria fiziologică a nou-născuților, care dispare în a 4-a până la a 10-a zi după naștere, iar la prematuri ceva mai târziu;
- albuminuria ortostatică, care este tipică copiilor cu vârsta cuprinsă între 7-18 ani și apare doar în poziție verticală a corpului;
- albuminurie tranzitorie (accident vascular cerebral), a cărei cauză pot fi diverse boli ale sistemului digestiv, anemie severă, arsuri, leziuni sau factori fiziologici: activitate fizică grea, hipotermie, emoții puternice, alimente abundente, bogate în proteine ​​etc.

Proteinuria organică (renală) se observă din cauza trecerii proteinelor din sânge prin zonele deteriorate ale endoteliului glomerulilor renali în boli de rinichi (glomerulonefrită, nefroză, nefroscleroză, amiloidoză, nefropatie a gravidelor), tulburări ale hemodinamicii renale (renală). hipertensiune venoasă, hipoxie), efecte trofice și toxice (inclusiv medicinale) asupra pereților capilarelor glomerulare.

proteinurie extrarenală (falsă).

Proteinurie extrarenală (falsă), în care sursa de proteine ​​din urină este un amestec de leucocite, eritrocite, bacterii și celule uroteliale. observată în afecțiunile urologice (urolitiază, tuberculoză renală, tumori renale și ale tractului urinar etc.).

Determinarea proteinelor în urină

Cele mai multe metode calitative și cantitative de determinare a proteinei în urină se bazează pe coagularea acesteia în volumul de urină sau la interfața mediilor (urină și acid).

Dintre metodele calitative de determinare a bek-ului în urină, cele mai utilizate sunt testul unificat cu acid sulfosalicilic și testul inel Heller.

Un test standardizat cu acid sulfasalicilic se efectuează după cum urmează. 3 ml de urină filtrată se toarnă în 2 eprubete. La unul dintre ele se adaugă 6-8 picături dintr-o soluție de acid sulfasalicilic 20%. Ambele tuburi sunt comparate pe un fundal întunecat. Urina tulbure dintr-o eprubetă care conține acid sulfasalicilic indică prezența proteinelor. Înainte de studiu, este necesar să se determine reacția urinei, iar dacă este alcalină, apoi se acidulează cu 2-3 picături dintr-o soluție de acid acetic 10%.

Testul Heller se bazează pe faptul că, în prezența proteinelor în urină, coagularea are loc la granița acidului azotic și a urinei și apare un inel alb. Într-o eprubetă se toarnă 1-2 ml dintr-o soluție de acid azotic 30% și exact aceeași cantitate de urină filtrată este stratificată cu grijă de-a lungul peretelui eprubetei. Apariția unui inel alb la marginea a două lichide indică prezența proteinelor în urină. Trebuie amintit că uneori se formează un inel alb în prezența unei cantități mari de urati, dar, spre deosebire de inelul proteic, acesta apare puțin deasupra limitei dintre două lichide și se dizolvă atunci când este încălzit [Pletneva N.G., 1987].

Cele mai frecvent utilizate metode cantitative sunt:

1) metoda unificată Brandberg-Roberts-Stolnikov, care se bazează pe testul inel Heller;
2) metoda fotoelectrocolorimetrică pentru determinarea cantitativă a proteinei în urină prin turbiditatea formată prin adăugarea de acid sulfasalicilic;
3) metoda biuretului.

Detectarea proteinei în urină, folosind o metodă simplificată, accelerată, se realizează folosind o metodă colorimetrică folosind hârtie indicator produsă de Lachema (Slovacia), Albuphan, Ames (Anglia), Albustix, Boehringer (Germania), Comburtest etc. Metoda constă în scufundare. o bandă specială de hârtie înmuiată în albastru de tetrabromofenol și tampon citrat în urină, care își schimbă culoarea de la galben la albastru în funcție de conținutul de proteine ​​din urină. Concentrația aproximativă de proteine ​​din urina de testat este determinată folosind o scară standard. Pentru a obține rezultate corecte, trebuie îndeplinite următoarele condiții. pH-ul urinei trebuie să fie în intervalul 3,0-3,5; urina care este prea alcalină (pH 6,5) va avea ca rezultat un fals pozitiv, iar urina prea acidă (pH 3,0) va avea ca rezultat un fals negativ.

Hârtia trebuie să fie în contact cu urina testată nu mai mult decât este indicat în instrucțiuni, altfel testul va da o reacție fals pozitivă. Acesta din urmă se observă și atunci când există o cantitate mare de mucus în urină. Sensibilitatea diferitelor tipuri și loturi de hârtie poate varia, astfel încât cuantificarea proteinelor din urină prin această metodă trebuie tratată cu prudență. Determinarea cantității sale în urina zilnică folosind hârtie indicatoare este imposibilă [Pletneva N.G., 1987]

Determinarea proteinuriei zilnice

Există mai multe moduri de a determina cantitatea de proteine ​​excretată în urină pe zi. Cea mai simplă este metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov.

Metodologie. Se toarnă 5-10 ml de urină zilnic bine amestecată într-o eprubetă și se adaugă cu grijă o soluție de acid azotic 30% de-a lungul pereților acesteia. Dacă în urină există proteine ​​în cantitate de 0,033% (adică 33 mg per 1 litru de urină), după 2-3 minute apare un inel alb subțire, dar clar vizibil. La o concentrație mai mică, proba este negativă. Dacă în urină există un conținut mai mare de proteine, cantitatea acesteia este determinată prin diluții repetate ale urinei cu apă distilată până când un inel încetează să se formeze. În ultima eprubetă, în care inelul este încă vizibil, concentrația de proteine ​​va fi de 0,033%. Prin înmulțirea cu 0,033 cu gradul de diluare a urinei, se determină conținutul de proteine ​​în 1 litru de urină nediluată în grame. Apoi, conținutul de proteine ​​din urina zilnică este calculat folosind formula:

K=(x V)/1000

Unde K este cantitatea de proteine ​​din urina zilnică (g); x - cantitatea de proteine ​​în 1 litru de urină (g); V este cantitatea de urină excretată pe zi (ml).

În mod normal, de la 27 la 150 mg (în medie 40-80 mg) de proteine ​​sunt excretate prin urină în timpul zilei.

Acest test vă permite să determinați numai proteine ​​fin dispersate (albumină) în urină. Metodele cantitative mai precise (metoda colorimetrică a lui Kjeldahl etc.) sunt destul de complexe și necesită echipamente speciale.

Cu proteinuria renală, nu numai albumina, ci și alte tipuri de proteine ​​sunt excretate în urină. O proteinogramă normală (conform Seitz et al., 1953) are următorul procent: albumină - 20%, α 1 -globuline - 12%, α 2 -globuline - 17%, γ-globuline - 43% și β-globuline - 8%. Raportul dintre albumine și globuline se modifică în diferite boli de rinichi, de exemplu. relația cantitativă dintre fracțiile proteice este perturbată.

Cele mai obișnuite metode de fracționare a uroproteinelor sunt următoarele: sărare cu săruri neutre, fracționare electroforetică, metode imunologice (reacție de imunodifuzie radială Mancini, analiză imunoelectroforetică, imunoelectroforeză de precipitare), cromatografia, filtrare pe gel și ultracentrifugare.

În legătură cu introducerea metodelor de fracționare a uroproteinelor bazate pe studiul mobilității electroforetice, variabilitatea greutății moleculare, mărimea și forma moleculelor de uroproteine, a devenit posibilă identificarea tipurilor de proteinurie caracteristice unei anumite boli și studierea clearance-urilor plasmatice individuale. proteine. Până în prezent, peste 40 de proteine ​​plasmatice au fost identificate în urină, inclusiv 31 de proteine ​​plasmatice în urină normală.

proteinurie selectivă

În ultimii ani, a apărut conceptul de selectivitate a proteinuriei. În 1955, Hardwicke și Squire au formulat conceptul de proteinurie „selectivă” și „neselectivă”, determinând că filtrarea proteinelor plasmatice în urină urmează un anumit model: cu cât greutatea moleculară a proteinei excretate în urină este mai mare, cu atât mai puțin clearance-ul acestuia și cu atât concentrația sa în urină finală. Proteinuria corespunzătoare acestui model este selectivă, spre deosebire de proteinuria neselectivă, care se caracterizează printr-o perversiune a modelului derivat.

Detectarea proteinelor cu o greutate moleculară relativ mare în urină indică o lipsă de selectivitate a filtrului renal și deteriorarea severă a acestuia. În aceste cazuri, se vorbește de selectivitate scăzută a proteinuriei. Prin urmare, determinarea fracțiilor proteice din urină folosind metode de electroforeză pe gel de amidon și poliacrilamidă este acum larg răspândită. Pe baza rezultatelor acestor metode de cercetare, se poate judeca selectivitatea proteinuriei.

Potrivit lui V.S Makhlina (1975), cel mai justificat este de a determina selectivitatea proteinuriei prin compararea clearance-urilor a 6-7 proteine ​​individuale din plasma sanguină (albumină, traneferină, α 2 - macroglobulină, IgA, IgG, IgM) folosind precise și specifice. metode imunologice cantitative de reacție de imunodifuzie radială conform lui Mancini, analiză imunoelectroforetică și imunoelectroforeză precipitată. Gradul de selectivitate al proteinuriei este determinat de indicele de selectivitate, care este raportul dintre proteinele comparate și de referință (albumină).

Studierea clearance-urilor proteinelor plasmatice individuale ne permite să obținem informații fiabile despre starea membranelor bazale de filtrare ale glomerulilor rinichilor. Legătura dintre natura proteinelor excretate prin urină și modificările membranelor bazale glomerulare este atât de pronunțată și constantă, încât uroproteinograma poate judeca indirect modificările patofiziologice ale glomerulii rinichilor. În mod normal, dimensiunea medie a porilor membranei bazale glomerulare este de 2,9-4 A° NM, ceea ce poate permite trecerea proteinelor cu o greutate moleculară de până la 10 4 (mioglobulină, α 1 acidă - glicoproteină, lanțuri ușoare de imunoglobuline, Fc și fragmente Fab de IgG, albumină și transferină).

Cu glomerulonefrita și sindromul nefrotic, dimensiunea porilor din membranele bazale ale glomerulilor crește și, prin urmare, membrana bazală devine permeabilă la moleculele proteice de dimensiune și masă mari (ceruloplasmină, haptoglobină, IgG, IgA etc.). Cu afectarea extremă a glomerulilor rinichilor, în urină apar molecule gigantice de proteine ​​din plasma sanguină (α 2 -macroglobulină, IgM și β 2 -lipoproteină).

Prin determinarea spectrului proteic al urinei, putem concluziona că sunt afectate predominant anumite zone ale nefronului. Glomerulonefrita cu afectare predominantă a membranelor bazale glomerulare se caracterizează prin prezența proteinelor cu greutate moleculară mare și medie în urină. Pielonefrita cu afectare predominantă a membranelor bazale ale tubilor se caracterizează prin absența proteinelor cu moleculară mare și prezența unor cantități crescute de proteine ​​​​moleculare medii și joase.

β2-Microglobulina

Pe lângă proteinele binecunoscute precum albumina, imunoglobulinele, lipoproteinele. fibrinogenul, transferrina, urina contine microproteine ​​plasmatice, printre care β 2 -microglobulina, descoperita de Berggard si Bearn in 1968, prezinta un interes clinic Avand o greutate moleculara mica (greutate moleculara relativa 1800), trece liber prin glomerulii. rinichi şi aproape complet reabsorbite în tubii proximali. Acest lucru permite determinarea cantitativă a β2-microglobulinei în sânge și urină pentru a determina rata de filtrare glomerulară și capacitatea rinichilor de a resorbi proteinele în tubii proximali.

Concentrația acestei proteine ​​în plasma sanguină și urină este determinată prin metoda radioimunologică folosind trusa standard „Phade-bas β 2 -mikroiest” (Pharmacia, Suedia). Serul sanguin al persoanelor sănătoase conține în medie 1,7 mg/l (variază de la 0,6 la 3 mg/l), iar urina conține în medie 81 μg/l (maximum 250 μg/l) de β2-microglobulină. Depășirea lui în urină peste 1000 mcg/l este un fenomen patologic. Conținutul de β2-microglobuline din sânge crește în bolile însoțite de filtrarea glomerulară afectată, în special în glomerulonefrita acută și cronică, boala polichistică a rinichilor, nefroscleroza, nefropatia diabetică, insuficiența renală acută.

Concentrația de β 2 -microglobuline în urină crește în bolile însoțite de afectarea funcției de reabsorbție a tubulilor, ceea ce duce la o creștere a excreției sale în urină de 10-50 de ori, în special cu pielonefrită, insuficiență renală cronică, purulentă. intoxicație, etc. Este caracteristic că cu cistita în Spre deosebire de pielonefrită, nu există o creștere a concentrației de β 2 -microglobuline în urină, care poate fi utilizată pentru diagnosticul diferențial al acestor boli. Cu toate acestea, atunci când se interpretează rezultatele studiului, trebuie să se țină seama de faptul că orice creștere a temperaturii este întotdeauna însoțită de o creștere a excreției de β2-microglobuline în urină.

Molecule medii de sânge și urină

Moleculele medii (MM), denumite altfel toxine proteice, sunt substanțe cu o greutate moleculară de 500-5000 daltoni. Structura lor fizică este necunoscută. Compoziția SM include cel puțin 30 de peptide: oxitocină, vasopresină, angiotensină, glucagon, hormon adrenocorticotrop (ACTH) etc. Se observă acumularea excesivă de SM cu o scădere a funcției renale și o cantitate mare de proteine ​​deformate și metaboliții acestora în sânge. Au un efect biologic divers și sunt neurotoxice, provoacă imunosupresie secundară, anemie secundară, inhibă biosinteza proteinelor și eritropoieza, inhibă activitatea multor enzime și perturbă fazele procesului inflamator.

Nivelul SM în sânge și urină este determinat printr-un test de screening, precum și prin spectrofotometrie în zona ultravioletă la lungimi de undă de 254 și 280 mm pe un spectrofotometru DI-8B, precum și prin spectrofotometrie dinamică cu procesare computerizată în intervalul de lungimi de undă 220-335 nm pe același spectrometru de la Beckman. Conținutul de SM din sânge este luat ca normă egal cu 0,24 ± 0,02 arb. unități, iar în urină - 0,312 ± 0,09 arb. unitati
Fiind deșeuri normale ale organismului, acestea sunt în mod normal îndepărtate din acesta noaptea prin filtrare glomerulară cu 0,5%; 5% dintre ele sunt eliminate în alte moduri. Toate fracțiile SM suferă reabsorbție tubulară.

Uroproteine ​​non-plasmatice (tisulare).

În plus față de proteinele plasmatice din sânge, pot exista proteine ​​non-plasmatice (țesuturi) în urină. Potrivit lui Buxbaum și Franklin (1970), proteinele non-plasmatice reprezintă aproximativ 2/3 din toți biocoloizii din urină și o parte semnificativă a uroproteinelor în proteinuria patologică. Proteinele tisulare intră în urină direct din rinichi sau din organele asociate anatomic cu tractul urinar, sau pătrund în sânge din alte organe și țesuturi, iar din acesta prin membranele bazale ale glomerulilor rinichiului în urină. În acest din urmă caz, excreția proteinelor tisulare în urină are loc în mod similar cu excreția proteinelor plasmatice de diferite greutăți moleculare. Compoziția uroproteinelor non-plasmatice este extrem de diversă. Printre acestea se numără glicoproteinele, hormonii, antigenele, enzimele.

Proteinele tisulare din urină sunt detectate folosind metode convenționale de chimie a proteinelor (ultracentrifugarea, cromatografie pe gel, diferite tipuri de electroforeză), reacții specifice la enzime și hormoni și metode imunologice. Acestea din urmă permit, de asemenea, determinarea concentrației uroproteinei non-plasmatice în urină și, în unele cazuri, determinarea structurilor tisulare care au devenit sursa apariției sale. Principala metodă de detectare a proteinelor non-plasmatice în urină este analiza de imunodifuzie cu antiser obținut prin imunizarea animalelor de experiment cu urină umană și ulterior epuizat (adsorbit) de proteinele plasmatice ale sângelui.

Studiul enzimelor din sânge și urină

În timpul procesului patologic, se observă tulburări profunde ale funcțiilor vitale ale celulelor, însoțite de eliberarea de enzime intracelulare în fluidele corpului. Diagnosticul enzimatic se bazează pe determinarea unui număr de enzime eliberate din celulele organelor afectate și care nu sunt caracteristice serului sanguin.
Studiile asupra nefronului uman și animal au arătat că în părțile sale individuale există o diferențiere enzimatică ridicată, strâns legată de funcțiile pe care le îndeplinește fiecare secțiune. Glomerulii rinichilor conțin cantități relativ mici de diferite enzime.

Celulele tubilor renali, în special părțile proximale, conțin cantitatea maximă de enzime. Activitatea lor ridicată se observă în ansa lui Henle, tubii drepti și canalele colectoare. Modificările activității enzimelor individuale în diferite boli de rinichi depind de natura, severitatea și localizarea procesului. Ele sunt observate înainte de apariția modificărilor morfologice la nivelul rinichilor. Întrucât conținutul diferitelor enzime este clar localizat în nefron, determinarea uneia sau alteia enzime în urină poate contribui la diagnosticul local al procesului patologic din rinichi (glomeruli, tubuli, cortex sau medular), diagnosticul diferențial al boli renale și determinarea dinamicii (atenuarea și exacerbarea) procesului în parenchimul renal.

Pentru diagnosticul diferențial al bolilor sistemului genito-urinar, se utilizează determinarea activității următoarelor enzime în sânge și urină: lactat dehidrogenază (LDH), leucină aminopeptidază (LAP), fosfatază acidă (AP), fosfatază alcalină (ALP) , β-glucuronidază, glutamin-oxaloacetic transaminaza (GAST), aldolaza, transamidinaza etc. Activitatea enzimelor din serul sanguin și urină se determină prin metode biochimice, spectrofotometrice, cromatografice, fluorimetrice și chemiluminiscente.

Enzimuria în bolile de rinichi este mai pronunțată și mai naturală decât enzima. Este deosebit de pronunțată în stadiul acut al bolii (pielonefrită acută, traumatisme, dezintegrare tumorală, infarct renal etc.). În aceste boli, este detectată activitate ridicată a transamidinazei, LDH, ALP și CP, hialuronidazei, LAP, precum și a unor enzime nespecifice precum GSH, catalaza [Polyantseva L.R., 1972].

Localizarea selectivă a enzimelor în nefron la detectarea PAP și a fosfatazei alcaline în urină ne permite să vorbim cu încredere despre bolile renale acute și cronice (insuficiență renală acută, necroza tubulilor renali, glomerulonefrita cronică) [Shemetov V.D., 1968]. Potrivit lui A.A Karelin și L.R Polyantseva (1965), transamidinaza este conținută în doar două organe - rinichiul și pancreasul. Este o enzimă mitocondrială a rinichilor și, în mod normal, este absentă în sânge și urină. În diferite boli de rinichi, transamidinaza apare în sânge și urină, iar în cazurile de afectare a pancreasului - numai în sânge.

Krotkiewski (1963) consideră că activitatea fosfatazei alcaline în urină este un test diferențial în diagnosticul glomerulonefritei și pielonefritei, a căror creștere este mai tipică pentru pielonefrita și glomeruloscleroza diabetică decât pentru nefrita acută și cronică. Amilazemia în creștere în dinamică cu o scădere simultană a amilasuriei poate indica nefroscleroza și contracția rinichilor PAP este de cea mai mare importanță în modificările patologice ale glomerulilor și tubulilor contorți ai rinichiului, deoarece conținutul său în aceste părți ale nefronului este mai mare [Shepotinovsky; V.P. şi colab., 1980]. Pentru a diagnostica nefrita lupică, se recomandă determinarea β-glucuronidazei și CP [Privalenko M.N. şi colab., 1974].

Atunci când se evaluează rolul enzimuriei în diagnosticul bolilor de rinichi, trebuie luate în considerare următoarele puncte. Enzimele, fiind proteine ​​în natură, cu greutate moleculară mică pot trece prin glomeruli intacți, determinând așa-numita enzimă fiziologică. Printre aceste enzime, α-amilaza (greutate moleculară relativă 45.000) și uropepsina (greutatea moleculară relativă 38.000) sunt detectate în mod constant în urină.

Alături de enzimele cu greutate moleculară mică, alte enzime pot fi găsite în concentrații mici în urina indivizilor sănătoși: LDH, aspartat și alanin aminotransferaze, ALP și CP, maltază, aldolază, lipază, diverse proteaze și peptidaze, sulfatază, catalază, ribonuclează, peroxidază.

Enzimele cu greutate moleculară mare cu o greutate moleculară relativă mai mare de 70.000-100.000, conform lui Richterich (1958) și Hess (1962), pot pătrunde în urină numai dacă permeabilitatea filtrului glomerular este afectată. Conținutul normal de enzime în urină nu ne permite să excludem un proces patologic în rinichi din cauza ocluziei ureterului. Cu epzimurie, enzimele pot fi eliberate nu numai din rinichii înșiși, ci și din alte organe parenchimatoase, celule ale membranelor mucoase ale tractului urinar, glandei prostatei, precum și elemente formate de urină în hematurie sau leucociturie.

Majoritatea enzimelor nu sunt specifice rinichilor, așa că este dificil de determinat de unde provin enzimele găsite în urina persoanelor sănătoase și bolnave. Totuși, gradul de enzimurie, chiar și pentru enzimele nespecifice, în caz de afectare a rinichilor este mai mare decât cel normal sau cel observat în bolile altor organe. Informații mai valoroase pot fi furnizate printr-un studiu cuprinzător al dinamicii unui număr de enzime, în special a celor specifice unui organ, cum ar fi transaminaza.

În rezolvarea problemei originii renale a enzimei în urină ajută studiul izoenzimelor cu identificarea fracțiilor tipice organului studiat. Izoenzimele sunt enzime care au acțiune izogenă (catalizează aceeași reacție), dar eterogene ca structură chimică și alte proprietăți. Fiecare țesut are un spectru de izoenzime caracteristic. Metodele valoroase pentru separarea izoenzimelor sunt electroforeza pe gel de amidon și poliacrilamidă, precum și cromatografia cu schimb ionic.

Proteina Bence Jones

În mielomul multiplu și macroglobulinemia Waldenström, proteina Bence-Jones este detectată în urină. Metoda de detectare a proteinei numite în urină se bazează pe reacția de termoprecipitare. Metodele utilizate anterior care evaluează dizolvarea acestei proteine ​​la o temperatură de 100 ° C și re-precipitarea la răcirea ulterioară sunt nesigure, deoarece nu toate corpurile proteice Bence-Jones au proprietățile corespunzătoare.

Este mai sigură detectarea acestei paraproteine ​​prin precipitarea ei la o temperatură de 40 -60 ° C. Cu toate acestea, chiar și în aceste condiții, precipitațiile pot să nu apară la prea acide (pH< 3,0—3,5) или слишком щелочной (рН >6.5) urină, cu TPR scăzut și concentrație scăzută de proteină Bence-Jones. Condițiile cele mai favorabile pentru precipitarea acestuia sunt asigurate de metoda propusă de Patnem: 4 ml de urină filtrată se amestecă cu 1 ml de tampon acetat 2 M pH 4,9 și se încălzește timp de 15 minute într-o baie de apă la o temperatură de 56 ° C. În prezența proteinei Bence Jones, în primele 2 minute apare un precipitat pronunțat.

Dacă concentrația de proteină Bence Jones este mai mică de 3 g/l, testul poate fi negativ, dar în practică acest lucru este extrem de rar, deoarece concentrația sa în urină este de obicei mai semnificativă. Nu se poate baza complet pe testele de fierbere. Cu deplină certitudine, poate fi detectat în urină prin metoda imuno-electroforetică folosind seruri specifice împotriva lanțurilor grele și ușoare ale imunoglobulinelor.

Instrucțiuni

Metode calitative pentru determinarea proteinelor în urină: Metoda Geller, test cu o soluție 20% de acid sulfosalicilic, test de fierbere etc. Metode semi-cantitative: folosirea testelor de diagnosticare pentru determinarea proteinelor în urină, metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov. Metode cantitative: turbidimetrice și colorimetrice.

Determinarea proteinelor în doza zilnică urinăîntr-o concentrație de 0,033 g/litru sau mai mult este o patologie. De regulă, în porțiunea de dimineață de urină concentrația de proteine ​​nu depășește 0,002 g/l, iar în fiecare zi urină concentrația de proteine ​​nu este mai mare de 50-150 mg de proteine.

Surse:

• determinarea proteinelor în urină

Urina este un produs al metabolismului uman. Se formează în timpul filtrării sângelui în rinichi, motiv pentru care compoziția urinei oferă o descriere clară a stării corpului uman.

Urina este o soluție complexă constând din mai mult de 150 de compuși. Unele substanțe specifice, de exemplu, acetona, acizii biliari, proteinele, glucoza, pot fi prezente numai în anumite boli.

Pentru a controla sănătatea umană, în primul rând, este necesar să se determine cantitatea de urină. Norma este producerea a 1-1,8 litri de urină pe zi. Când se eliberează mai mult de 2 litri de urină, acesta este un semn al unei posibile tulburări în funcționarea rinichilor, diabet zaharat și o serie de alte boli. Dacă se produc mai puțin de 0,5 litri de urină pe zi, există un blocaj al ureterului sau vezicii urinare.

Culoarea urinei

Culoarea urinei depinde de mulți factori și poate varia de la galben deschis la portocaliu. Prezența anumitor nuanțe poate fi afectată de anumite alimente, precum și de medicamentele luate de o persoană.

După administrarea medicamentelor, urina poate deveni colorată și poate lua o nuanță roșiatică. Dacă o persoană se mișcă activ și produce o cantitate mare de transpirație, urina va avea o culoare galben intens, ca atunci când ia produse precum Nitroxolina sau Biomicină.

Dacă o persoană nu a luat alimente sau medicamente colorante, dar culoarea urinei sale este diferită de cea obișnuită, se poate suspecta prezența unei boli în organism. De exemplu, în cazul bolilor hepatice, urina va avea o culoare galben închis sau verzui.

Prezența sângelui în urina excretată indică în mod clar prezența unei pietre sau a sângerării renale, dacă se observă și durere.

Dacă urinarea este dificilă, acest lucru poate indica un proces inflamator cauzat de un fel de infecție a vezicii urinare. Dar urina murdară și tulbure indică o boală renală severă.

Proteine ​​în urină

Nu există proteine ​​în sângele unei persoane sau cantitatea acesteia este atât de mică încât nu poate fi detectată folosind teste de laborator. Dacă proteina este detectată în urină, este necesar să se efectueze teste repetate, deoarece poate fi prezentă atunci când o persoană se trezește dimineața, precum și după muncă fizică grea sau stres la sportivi.

Este 100% imposibil de determinat vizual dacă proteinele sunt prezente în urină sau nu. Se poate doar ghici când există o cantitate mare de fulgi albici în urină.

Dacă proteina este detectată în mod repetat în urină, aceasta indică prezența unui fel de boală renală. Procesele inflamatorii care apar în ele provoacă o ușoară creștere a cantității de proteine. Dacă mai mult de 2 grame sunt excretate prin urină, acesta este un semnal alarmant.

Pielonefrita este o boală inflamatorie care afectează pelvisul renal, caliciul și parenchimul. În cele mai multe cazuri, cauza inflamației este o infecție bacteriană. Recuperarea completă este posibilă numai cu diagnosticarea în timp util, așa că, dacă apar simptome, este necesară o examinare amănunțită.

Ţintă– determinarea proteinelor în urină.

Indicatii– afecțiuni hipertensive în timpul sarcinii, boli de rinichi la gravide

Contraindicatii- Nu.

Posibile complicații- Nu

Resurse– vas, borcan steril, eprubete, acid sulfosalicilic 30% sau acetic 3%, pipeta, arzator de alcool.

Algoritm de acțiune:

1. Explicați gravidei despre necesitatea determinării proteinelor în urină.

2. Cereți femeii însărcinate să colecteze urina într-un borcan steril.

3. Testați cu acid sulfosalicilic: turnați 4-5 ml de urină într-o eprubetă, adăugați 6-10 picături de acid. Dacă există proteine ​​în urină, se vor forma sedimente sau tulburări.

4. Proba cu acid acetic 3%: se toarnă 8-10 ml de urină într-o eprubetă, se fierbe pe un arzător cu alcool, dacă urina conține proteine, va deveni tulbure. Adăugați câteva picături de soluție de acid acetic 3% în urina tulbure. Dacă turbiditatea dispare în urină, testul este negativ.

NOTE Determinat în secția de primire a unei maternități.

Standard „Determinarea datei scadenței așteptate”.

Ţintă: evaluează abilitățile practice ale absolventului în determinarea datei scadenței așteptate

Indicatii– fiecare vizită la o maternitate a unei femei însărcinate.

Contraindicatii- Nu

Posibile complicații- Nu

Resurse– o masă, două scaune, un calendar, un calendar obstetric, informații scrise despre data primei zile a ultimei menstruații, prima apariție la clinica antenatală, data ecografiei cu încheiere, data concediului prenatal

Algoritm de acțiune:

1. Prezentați-vă și explicați-i femeii importanța calculării termenului de scadență așteptat.
2. Aflați de la gravidă prima zi a ultimei menstruații, adăugați 280 de zile la această dată, sau după formula lui Naegele, adăugați 7 zile la prima zi a ultimei menstruații și scădeți 3 luni, data rezultată este data scadenței pentru menstruație.
3. Aflați data primei mișcări a fătului, până astăzi pentru o femeie primipară adăugați 140 de zile și pentru o femeie multipară 154 de zile, data rezultată este data limită pentru mișcarea fătului.
4. Pe baza ciclului menstrual, determinați în ce zi a avut loc ultima ovulație și din prima zi a ultimei menstruații, numărați înapoi trei luni și adăugați numărul de zile înainte de ovulație, obțineți data nașterii.
5. Calculați data scadenței pe baza primei vizite la clinica prenatală. Eroarea va fi minimă dacă gravida a consultat un medic în primele 12 săptămâni de sarcină.
6. Stabiliți data scadenței pe baza datei concediului prenatal. Perioada concediului prenatal începe la 30 de săptămâni de sarcină. Adăugați 10 săptămâni la această dată și obțineți data scadentă.
7. Calculați data scadenței folosind o ecografie efectuată la clinica prenatală.

Standard „Inspecția organelor genitale externe”

Ţintă: evaluează abilitățile practice ale absolventului atunci când examinează organele genitale externe ale unei femei însărcinate

Indicatii– vizită inițială la o maternitate pentru o femeie însărcinată, internare într-un spital cu travaliu regulat.

Contraindicatii- Nu

Posibile complicații- Nu

Resurse– fantomă femeie, canapea, lenjerie intimă de unică folosință pentru canapea

Algoritm de acțiune:

1. Prezentați-vă, explicați-i femeii importanța examinării organelor genitale externe, etapele implementării acesteia și obțineți consimțământul acesteia

2. Efectuați dezinfecția igienică a mâinilor

3. Puneți mănuși sterile la ambele mâini.

4. Inspectați organele genitale externe: evaluați tipul de creștere a părului, structura labiilor mari și mici, clitorisul și starea perineului.

5. Folosind degetul mare și arătătorul ambelor mâini, întindeți labiile mari, examinați starea deschiderii externe a uretrei, vestibulul vaginului, palpați zona glandelor lui Bartholin (treimea inferioară a labiilor mari). ).

6. Scoateți mănușile de unică folosință și puneți-le într-o cutie de depozitare sigură.

7. Spălați-vă mâinile cu săpun.

8. Furnizați femeii însărcinate informații despre starea organelor genitale externe.

9. Notați în documentație.

NOTĂ Examinarea se desfășoară în mod confidențial, fără a umili demnitatea femeii.

Standard „Îngrijire de urgență pentru eclampsie”

Ţintă: să evalueze abilitățile practice ale absolventului în furnizarea de îngrijiri de urgență pentru eclampsie

Indicatii– atac de convulsii în timpul eclampsiei

Contraindicatii- Nu

Posibile complicații– atac repetat de convulsii, comă eclamptică.

Resurse– manechin de femeie, soluție de sulfat de magneziu 25%, spatulă, suport pentru limbă, seringă 20 ml, soluție salină 500 ml, sistem de perfuzie intravenoasă, alcool, vată, garou

Algoritm de acțiune:

1. În caz de convulsii, sunați tot personalul disponibil și echipa de resuscitare fără a părăsi pacientul.

2. Efectuați următoarele activități în același timp:

· curățați căile respiratorii deschizându-vă gura cu o spatulă sau o lingură învelită în tifon și întindeți limba cu un suport pentru limbă.

· scoateți saliva din gură de îndată ce inhalați, asigurați-vă accesul liber;

· dupa oprirea crizelor se administreaza intravenos o doza initiala de sulfat de magneziu – 25%-20 ml timp de 10-15 minute.

3. Începeți o perfuzie intravenoasă de 320 ml de ser fiziologic cu 80 ml - soluție de sulfat de magneziu 25%

4. Sub controlul tensiunii arteriale și terapie cu magneziu în curs, transferați pacienta pe o targă și transportați la secția de terapie intensivă a celei mai apropiate maternități.

NOTĂ

În cazul eclampsiei, nașterea trebuie să aibă loc după stabilizarea stării pacientului, dar nu mai târziu de 12 ore de la debutul convulsiilor.

Standard „Oferirea de îngrijiri de urgență pentru preeclampsia severă”.

Ţintă: să evalueze abilitățile practice ale absolventului în furnizarea de îngrijiri de urgență pentru preeclampsia severă

Indicatii– preeclampsie severă

Contraindicatii- în timpul unui atac de convulsii

Posibile complicații– atac de convulsii, comă eclamptică.

Resurse– manechin de femeie, soluție de sulfat de magneziu 25%, seringă 20 ml, soluție salină 500 ml, sistem de perfuzie intravenoasă, alcool, vată, garou

Algoritm de acțiune:

1. Faceți un diagnostic: „Preeclampsie severă” dacă este prezent unul dintre aceste simptome: cefalee, durere în regiunea epigastrică, vedere încețoșată, pete intermitente în fața ochilor, greață, vărsături, pe fondul hipertensiunii arteriale (140/90 mm). Hg și peste) și proteinurie.

2. Apelați tot personalul disponibil și echipa de resuscitare fără a părăsi pacientul.

3. Efectuați următoarele activități în același timp:

· Așezați femeia însărcinată pe o suprafață plană, evitând rănirea, și întoarceți capul pacientului în lateral.

· se administrează intravenos o doză iniţială de sulfat de magneziu – 25%-20 ml timp de 10-15 minute.

4. Începeți o perfuzie intravenoasă de 320 ml de ser fiziologic cu 80 ml de soluție de sulfat de magneziu 25%.

5. Când tensiunea arterială este egală sau mai mare de 160/100 mmHg. reglați tensiunea arterială prin prescrierea a 10 mg de nifedipină sublingual, din nou după 30 de minute 10 mg sub monitorizarea tensiunii arteriale (mențineți tensiunea arterială la 130/90-140/95 mmHg).

6. Sub controlul tensiunii arteriale și terapie cu magneziu în curs, transferați pacienta pe o targă și transportați la secția de terapie intensivă a celei mai apropiate maternități.

NOTĂ Dacă apar semne de supradozaj cu sulfat de magneziu, administrați intravenos 10 ml de soluție de gluconat de Ca 10% timp de 10 minute.

"Amniotomie" standard.

Ţintă- deschiderea sacului amniotic.

Indicatii– înainte de inducerea travaliului, stimularea travaliului, slăbiciune a travaliului Contraindicatii– condiții amenințătoare ale mamei sau ale fătului

Posibile complicații– pierderea unor părți mici ale fătului, infecție ascendentă, lezarea vaselor sacului amniotic, desprinderea unei placente situate în mod normal

Resurse– un scaun ginecologic, un scutec individual, mănuși sterile, un antiseptic pentru tratarea organelor genitale externe ale femeii, o ramură de pense cu glonț.

Algoritm de acțiune:

1. Prezintă-te.

2. Explicați femeii necesitatea acestei operații.

3. Luați consimțământul informat al pacientului pentru procedură

4. Asezati femeia pe scaunul ginecologic, asezand o unica folosinta

5. Tratați organele genitale externe ale femeii cu o soluție antiseptică și puneți un scutec steril pe stomacul femeii.

6. Efectuați dezinfecția igienică a mâinilor.

7. Purtați mănuși de unică folosință la ambele mâini.

8. Folosind degetele mâinii stângi, întindeți labiile, introduceți secvențial în vagin

arătător, apoi degetul mijlociu al mâinii drepte.

9. Introduceți maxilarul pensei glonț în vagin între index și mijloc

degete.

10. Perforați sacul amniotic.

11. Introduceți degetul arătător în orificiul rezultat din sacul amniotic, apoi degetul mijlociu, lărgiți treptat gaura și îndepărtați membranele de pe cap. Eliberați lichidul amniotic lent, sub controlul degetelor (prevenirea pierderii unor părți mici, desprinderea unei placente situate în mod normal).

13. Scoateți degetele afară.

14. Scoateți mănușile și puneți-le într-o cutie de depozitare sigură.

15. Spălați-vă mâinile cu săpun.

16. Notează datele din istoricul nașterii.

NOTĂ.

Pentru polihidramnios, faceți o gaură mică și eliberați încet apa. Este necesar să se controleze rata de scurgere a apei, deoarece dacă este eliberată rapid și brusc, părți mici ale fătului pot cădea. După ce apa se sparge, femeii i se recomandă să se întindă timp de 30 de minute.

Compoziția locului de muncă pentru determinarea proteinelor în urină include următoarele elemente:

1. Eprubete chimice, eprubete de aglutinare.
2. Set pipete gradate.
3. Pipete cu un capăt îngust, întins.
4. Lămpi cu alcool sau arzător cu gaz.
5. Foaie neagra.
6. Acid acetic glacial.
7. Acid sulfosalicilic.
8. Acid azotic concentrat.
9. Apa distilata.

Metode pentru determinarea proteinelor în urină

Toate metodele utilizate pentru determinarea calitativă a proteinelor în urină se bazează pe coagularea proteinelor. Coagularea proteinelor se manifestă prin grade variate de turbiditate (de la opalescență la turbiditate severă) sau pierderea fulgilor.

Determinarea calitativă a proteinei în urină poate fi efectuată în unul dintre următoarele moduri:

1. fierbere cu o soluție de acid acetic 10%;
2. reacție cu o soluție 20% de acid sulfosalicilic;
3. reacția cu soluție de acid azotic 50% (testul Geller);
4. reacție cu o soluție 1% de acid azotic într-o soluție saturată de sare de masă (testul Heller modificat conform Larionova).

Înainte de determinarea calitativă a proteinei în urină, se efectuează următoarele lucrări pregătitoare:
1. Urina tulbure este filtrată printr-un filtru de hârtie. Dacă nu se poate obține un filtrat limpede, se filtrează din nou prin același filtru, sau se amestecă urina cu o cantitate mică de pământ infuzor sau talc, după care se filtrează.
2. Dacă urina este alcalină, se acidifică cu o soluție de acid acetic 10% până la o reacție ușor acidă sub controlul turnesolului sau hârtiei indicator universal.
3. Cu un conținut scăzut de sare (urină galben deschis sau galben pal cu greutate specifică scăzută) la fiecare
Adăugați câteva picături dintr-o soluție saturată de sare de masă în probă, deoarece lipsa sărurilor provoacă coagularea proteinelor.
4. Gradul de turbiditate se observă folosind un fond negru. Ca fundal se folosește carton negru sau hârtie neagră folosită în fotografie. Luând în considerare reacția pe un fundal negru, vă permite să identificați cel mai mic grad de turbiditate.

Eprubetele numerotate sunt plasate într-un suport separat. Ei efectuează una dintre reacțiile descrise mai jos.

1. Testați prin fierbere cu o soluție de acid acetic 10%. Pentru a efectua acest test, aveți nevoie de o soluție 10% de acid acetic, care se prepară după cum urmează: 10 ml de acid acetic glacial se pun într-un cilindru și se completează cu apă distilată până la marcajul de 100 ml.

Tehnica de determinare a proteinelor. 10-12 ml de urină filtrată dintr-o reacție ușor acidă se pun într-o eprubetă chimică. Apoi, partea superioară a eprubetei cu urină este încălzită cu grijă până la fierbere și se adaugă 8-10 picături dintr-o soluție de acid acetic 10%. O eprubetă cu urină este privită pe un fundal negru în lumină transmisă. În prezența proteinelor în urină, apare turbiditate în diferite grade (de la opalescență la turbiditate severă) sau apar fulgi. Partea inferioară a eprubetei, care nu a fost încălzită, servește drept control. Acest test detectează cantitatea de proteine ​​începând de la 0,015%o (%o - promille).

2. Reacția cu o soluție 20% de acid sulfosalicilic. O soluție de acid sulfosalicilic 20% se prepară după cum urmează: 20 g de acid sulfosalicilic se dizolvă în 70-80 ml apă distilată, se transferă într-un cilindru de 100 ml și se completează cu apă distilată până la semn. Reactivul preparat este depozitat într-un recipient de sticlă închisă la culoare.

Tehnica de determinare a proteinelor. 2-3 ml de urină filtrată dintr-o reacție slab acidă se pun în două eprubete de același diametru, se adaugă 3-4 picături dintr-o soluție de acid sulfosalicilic 20% într-una dintre eprubete, cealaltă eprubetă servește ca un Control. Dacă în eprubeta cu reactiv există proteină, apare turbiditatea sau cad fulgi de proteină coagulată. În tubul de control lichidul rămâne limpede. Acidul sulfosalicilic, împreună cu proteina serică, precipită albumoze (peptide), care sunt un produs de descompunere a proteinelor. Pentru a clarifica cauza urinei tulburi, o eprubetă cu urină este încălzită. Turbiditatea cauzată de formarea proteinelor din zer crește, în timp ce turbiditatea cauzată de prezența albumozei dispare. Acest test are aceeași sensibilitate ca și cel precedent.

3. Reacția cu soluție de acid azotic 50% (testul Geller). O soluție 50% de acid azotic se prepară după cum urmează: se adaugă 50 ml apă distilată (diluție 1:1) la 50 ml acid azotic cu o greutate specifică de 1,2-1,4.

Tehnica de determinare a proteinelor. 1 ml de acid azotic 50% se toarnă într-o eprubetă mică îngustă (nămol de aglutinare). 1 ml de urină de testare filtrată este preluat într-o pipetă cu un capăt îngust prelungit, stratificat pe reactiv și eprubeta este transferată în poziție verticală. Când proteina este prezentă, la interfața lichidă apare un inel alb. Momentul în care apare inelul și proprietățile sale depind de cantitatea de proteine: dacă există puține proteine, inelul nu apare imediat, așa că aspectul său este monitorizat timp de 2,5-3 minute. Cantitatea minimă de proteine ​​determinată prin această metodă este de 0,033°/oo. Cu un conținut mai mic de proteine ​​în urină, nu se formează un inel. Rezultatele reacției sunt înregistrate pe un fundal negru în lumină transmisă.

4. Reacția cu o soluție de 1% de acid azotic într-o soluție saturată de sare de masă - un test Heller modificat (conform lui Larionova). Pentru a efectua testul, utilizați o soluție de acid azotic 1% preparată într-o soluție saturată de sare de masă (reactiv Larionova). Se dizolvă 35 g de sare de masă în 100 ml apă distilată, se filtrează soluția, se adaugă 99 ml din soluția saturată de sare de masă preparată la 1 ml de acid azotic concentrat cu o greutate specifică de 1,2-1,4.

Tehnica de determinare a proteinelor la fel ca și în reacția cu o soluție de acid azotic 50% (testul Geller), dar în loc de 1 ml dintr-o soluție de acid azotic 50%, se toarnă 1 ml de reactiv Larionova într-o eprubetă și se adaugă 1 ml de urină. aceasta. Apariția unui inel alb la interfața lichidelor indică prezența proteinelor în urina testată. Testul Larionova este la fel de sensibil ca și testul Heller.

5. Test colorimetric (uscat) pentru determinarea calitativă a proteinei. Un test colorimetric (uscat) pentru determinarea calitativă a proteinei în urină se bazează pe efectul pe care îl are proteina asupra culorii indicatorului dintr-o soluție tampon.

Tehnica de determinare a proteinelor. O bucată de hârtie indicator concepută pentru a determina proteina este scufundată în urină pentru o perioadă scurtă de timp. Testul este considerat pozitiv dacă bucata de hârtie devine albastru-verde.

Determinarea cantitativă a proteinelor în urină

Determinarea cantitativă a proteinei în urină se bazează pe faptul că, atunci când urina care conține proteine ​​este stratificată cu o soluție 50% de acid azotic sau reactiv Larionova, se formează un inel alb la marginea celor două lichide, iar dacă apare un inel alb clar. cu 3 minute, apoi conținutul de proteine ​​este de 0,033% o sau 33 mg în 1000 ml de urină. Apariția unui inel mai devreme de 3 minute indică un conținut mai mare de proteine ​​în urină.
La cuantificarea proteinelor în urină, se respectă următoarele reguli:

1. Determinarea cantitativă a proteinei se efectuează numai în acele porțiuni de urină în care a fost detectată calitativ.
2. Determinarea se face cu urina filtrata cu grija.
3. Tehnica de stratificare a urinei de testat cu o soluție 50% de acid azotic sau reactiv Larionova într-un raport de reactiv la urină (1:1) este urmată cu strictețe.
4. Timpul de apariție a inelului este determinat cu ajutorul unui cronometru: în calculul final al cantității de proteine, se ia în considerare timpul de stratificare a urinei pe acid azotic, care este de 15 secunde.
5. Diluarea urinei se efectuează pe baza proprietăților inelului. În acest caz, fiecare diluție ulterioară de urină este pregătită din cea anterioară.
6. Inelele sunt identificate pe un fundal negru.

Cele mai comune sunt două metode pentru determinarea cantitativă a proteinei în urină: metoda Roberts-Stolnikov-Brandberg și metoda lui S. L. Ehrlich și A. Ya.

1. Metoda Roberts-Stolnikov-Brandberg. Conform acestei metode, cantitatea de proteine ​​din urină se determină prin diluarea acesteia până când, atunci când urina este stratificată cu o soluție 50% de acid azotic sau reactiv Larion, inelul apare exact în 3 minute. Cantitatea de proteine ​​se calculează prin înmulțirea a 0,033% cu gradul de diluare a urinei. Rezultatul obținut exprimă cantitatea de proteine ​​​​în miligrame la 1000 ml de urină, adică în promile (%o).
2. Metoda lui S. L. Ehrlich și A. Ya Althauzen. O serie de tuburi de aglutinare sunt plasate într-un suport, în care se toarnă mai întâi 1 ml dintr-o soluție 50% de acid azotic sau reactiv Larionova. Urina de testat se prelevează cu o pipetă separată, curată, uscată, cu un capăt îngust, întins și se pune în straturi pe reactiv, după care se pornește cronometrul. Timpul de apariție a inelului este monitorizat prin plasarea eprubetei pe un fundal negru. Când apare inelul, cronometrul este oprit.

La stratificarea urinei, în funcție de cantitatea de proteine, poate apărea un inel compact, lat sau sub formă de fir. Un inel compact, larg apare imediat după stratificarea urinei pe reactiv. Inelul sub formă de fir poate apărea imediat, înainte de a trece un minut sau în decurs de unul până la patru minute.

Dacă un inel sub formă de fir apare în decurs de una până la 4 minute, nu este nevoie să diluați urina!
Pentru a calcula cantitatea de proteine ​​în acest caz, este suficient să folosiți planul de masă propus de autori (Tabelul 1).

Exemplul 1. Când urina a fost stratificată pe reactiv, în 2 minute s-a format un inel sub formă de fir. Dacă un inel s-ar fi format în 3 minute, cantitatea de proteină ar fi de 0,033%.

În acest caz, inelul s-a format mai devreme. Corecția corespunzătoare, conform tabelului de plan, pentru un timp de 2 minute este egală cu 1+1/8. Aceasta înseamnă că proteina dintr-o porțiune dată de urină va fi de 1+1/8 ori mai mare decât 0,033°/oo, adică 0,033%o X(1+1/8) = 0,037°/oo.

Când apare un inel sub formă de fir în decurs de 1 minut, adică după 40-60 de secunde, faceți o diluție de 1,5 ori de urină (2 părți urină + 1 parte apă), apoi stratificați din nou urina diluată pe reactiv și înregistrați aspectul a inelului. La calcularea rezultatelor, se ține cont de faptul că urina a fost diluată de 1,5 ori.

Exemplul 2. După stratificarea urinei diluate de 1,5 ori, în 2 minute a apărut un inel sub formă de fir. Dacă inelul ar fi apărut la 3 minute, proteina ar fi fost de 0,033%. Modificarea corespunzătoare conform tabelului de plan pentru un timp de 2 minute este 1+1/8. Proteina în urină conține 0,033%oX1,5X(1+1/8) = 0,056%o.

Dacă apare imediat un inel sub formă de fir, urina este diluată de 2 ori (1 parte urină + 1 parte apă). Urina diluată este din nou stratificată pe reactiv și se observă aspectul unui inel după 1 minut.

Exemplul 3. La stratificarea urinei diluate de două ori pe reactiv, a apărut un inel sub formă de fir după 1 minut și 15 secunde. Apoi, cantitatea de proteină din urina testată, prin analogie cu calculele anterioare, va fi egală cu
0,033%оХ2Х(1+3/8) = 0,091%.
Dacă apare un inel larg, urina este diluată de 4 ori (1 parte urină + 3 părți apă).
Odată cu stratificarea ulterioară a urinei diluate, un inel sub formă de fir se poate forma fie înainte, fie după un minut. În astfel de cazuri, cantitatea de proteină este calculată prin analogie cu exemplele anterioare, adică 0,033% o este înmulțit cu gradul de diluție și corecția corespunzătoare.

Exemplul 1. După diluarea urinei de 4 ori, inelul a apărut imediat. Urina este diluată de 2 ori. După stratificarea urinei diluate de 8 ori (4X2), un inel sub formă de fir s-a format în 1,5 minute. În acest caz, cantitatea de proteină este de 0,033%oX8X1,25 = 0,33%o etc.
Când apare un inel compact, urina este diluată de 8 ori (1 parte urină + 7 părți apă). Atunci când urina diluată este ulterior stratificată pe reactiv, se poate forma fie un inel compact, larg, fie sub formă de fir.

Exemplul 2. Când urina a fost stratificată pe acid azotic, sa format imediat un inel compact. Urina este diluată de 8 ori (1 parte urină + 7 părți apă) și stratificată din nou. Acest lucru a produs din nou un inel compact. Apoi urina este diluată încă de 8 ori (pentru a face acest lucru, luați 1 parte din urină diluată într-un cilindru sau eprubetă și adăugați 7 părți de apă). După un alt strat de urină diluată, s-a format imediat un inel sub formă de fir. Urina se diluează de 2 ori (1 parte urină + 1 parte apă). După un alt strat de urină diluată, în 2 minute s-a format un inel sub formă de fir. Cantitatea de proteină dintr-o porțiune dată de urină se calculează după cum urmează: 0,033,%oX8X8X2X(1+1/8) = 4,8%o.

În plus față de tabelul de plan, există un tabel cu cifrele de proteine ​​calculate (Tabelul 2). Dacă urina nu este diluată, atunci cantitatea de proteine ​​se găsește în coloana „Urina întreagă, nediluată”. Când diluați urina de un număr întreg de ori (8,4,2), utilizați tabelul. 1. Când diluați urina de 1,5 ori, utilizați tabelul. 2.

Tehnica de utilizare a unui tabel pentru determinarea conținutului de proteine ​​în urină

În coloanele corespunzătoare ale tabelului, indicați momentul apariției inelului și gradul de diluare a urinei.
Numărul situat în punctul de intersecție al liniilor orizontale și verticale trase din acești doi indicatori indică cantitatea de proteină din urina testată (%o).

Este posibil ca, cu un test calitativ pozitiv pentru proteine, un inel să nu se formeze atunci când este stratificat cu o soluție de acid azotic 50%. Aceasta înseamnă că există mai puțin de 0,033% proteine ​​în urină. În astfel de cazuri, cantitatea de proteină din formularul de analiză este desemnată prin termenul „urme”.

Dacă proteina este cuantificată, conținutul de proteine ​​​​în promille este notat pe formularul de analiză a urinei, de exemplu, „proteină - 0,66%o”.

Pe lângă determinarea cantitativă a proteinei într-o porțiune separată de urină, se calculează cantitatea sa zilnică în grame. În acest scop, se colectează zilnic urina, se măsoară cantitatea acesteia și se determină conținutul de proteine ​​în promile. Apoi se face calculul. De exemplu, cantitatea zilnică de urină este de 1800 ml, proteina este de 7°/oo. Aceasta înseamnă că cantitatea zilnică de urină conține proteine: 1,8X7 = 12,6 g.